產(chǎn)品簡介：
?本產(chǎn)品與傳統(tǒng)質(zhì)粒提取方法比較，具有以下特點：
技術(shù)先進——采用獨特 的疏水膜技術(shù)，有效地去除各種蛋白質(zhì)和大部分 RNA；
使用安全——這是一個沒有有機溶液污染的操作過程.
質(zhì)量可靠——提取所得的質(zhì)粒純度高；
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組份 |
BKM-ZL-X50（50次） |
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Mini Column |
50 |
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2 ml Collection Tube |
50 |
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Buffer K1 (Cell resuspension solution) |
15 ml |
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Buffer K2 (Cell Lysis solution) |
15ml |
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Buffer K3 (Neutralization solution) |
20ml |
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Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入無水乙醇 50 ml |
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Buffer KE (Elution solution) |
15ml |
使用說明：
1. 實驗前準備工作：詳細閱讀該手冊熟悉各步驟，并準備好所有的試劑盒組分，2 ml 離心管以及 65 ℃的溫浴條件。
2. Buffer KW 第一次使用前請按瓶上標簽加入 50 ml 無水乙醇。每次使用后，請立即擰緊蓋子。
3. K2 在低溫下可能會產(chǎn)生沉淀，可在 37 ℃溫育數(shù)分鐘待溶液澄清后即可使用。因 K2 中含有堿性成分，為減少被空氣中 CO2 中和，請使用后立刻擰緊蓋子。K3 使用前請預冷至 4 ℃。
4.加入 K2 和 K3 后的顛倒混勻的動作一定要輕柔，否則會影響質(zhì)粒質(zhì)量。加入 K3 后的離心條件最好是 4 ℃，其他離心條件室溫即可。
操作步驟：
1. 取1.5-5.0ml 過夜培養(yǎng)的菌液，加入一新的 2ml 離心管中，室溫 6000 rpm 離心 5 min 沉淀菌體。棄上清液。
注意：盡量將上清液倒干凈，最后可倒扣于吸水紙上吸干殘余上清液。
2. 向管中加入 250 μl Buffer K1，劇烈震蕩細菌沉淀，將菌體完全打散。
注意：確保菌體沉淀完全散開，無可見細菌團塊，否則會降低質(zhì)粒的產(chǎn)量。
3. 向管中加入 250 μl Buffer K2，輕輕顛倒混勻 5-10 次。室溫靜置 2-5 min。
注意：1）顛倒的動作要輕柔，切勿劇烈震蕩，且裂解時間不宜超過5 min，否則會導致基因組DNA斷裂污染質(zhì)粒。
2）當使用完 Buffer K2 以后，須蓋緊瓶蓋保存于室溫，避免與空氣中的 CO2 反應。
4.向管中加入350μl Buffer K3（可以預冷至4 ℃，也可以在常溫），并溫和地上下顛倒離心管10-20 次，直至形成白色絮狀沉淀。
5. 在4 ℃，12000 rpm 以上離心10 min，或者常溫12000 rpm 離心3-4 min。
注意：提高離心速度和時間有利于沉淀貼壁更加緊密，但是常溫下不宜離心時間過長，否則會使液體溫度升高，造成質(zhì)粒 DNA 降解。
6.小心將細胞離心的上清液轉(zhuǎn)至吸附柱子內(nèi)，室溫 12000 rpm 離心 30s，使裂解液完全流過柱子。棄去收集管中的過濾液。
7. 把柱子重新裝入 2 ml 收集管中，加入 700 μl Buffer KW 至柱子，室溫 12 000 rpm 離心 1 min，棄去洗滌液。
注意：KW 在使用之前必須加入 50 ml 95%或者無水乙醇。Buffer KW 應置于室溫下。
8.（可選）重復用 700 μl 70%乙醇（室溫）洗滌柱子。室溫 12 000 rpm 離心 1 min。
9. 棄收集管中的濾液，將空柱子套回 2 ml 收集管內(nèi)。室溫下，最高轉(zhuǎn)速或者 13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。
注意：此步驟不可省，否則將導致乙醇殘留于 DNA 中，影響后續(xù)反應。
10. 把柱子裝在一個干凈的 1.5 ml 離心管上，加入50μl Buffer KE （可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或純水代替，純水可預先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0）到柱基質(zhì)膜的中央，室溫放置 1-5 min，13000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。
注意：1）Buffer KE在65 ℃預熱或者加入后放置時間稍長，對于增加質(zhì)粒產(chǎn)量會有幫助。
2）第一次洗脫可以洗脫出膜上80%左右的DNA。如果用30 μl Buffer KE再洗脫一次，可以把殘余的DNA洗脫出來，但是會降低質(zhì)粒的純度（不推薦）。
注意事項：
?如不慎接觸皮膚可立即用大量的洗滌劑和清水清洗。
?為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴 一次性手套操作。
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暫無產(chǎn)品問答!
暫無參考文獻
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