產(chǎn)品簡介：
?本產(chǎn)品為熱啟動、高保真DNA 聚合酶，該酶具有5′-3′DNA 聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，擴(kuò)增能力強(qiáng)，延伸速度快，特異性好。適用于長短片段快速PCR擴(kuò)增，1kb以內(nèi)延伸速度可達(dá)1s/kb，大幅節(jié)省PCR反應(yīng)時間，同時兼具一定的保真性和高產(chǎn)量的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，其保真性約為Taq DNA聚合酶的80倍。擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，對粗樣品也具有優(yōu)異的擴(kuò)增性能。
產(chǎn)品組份：
|
組份 |
BKM-PCR-H1 |
BKM-PCR-H5 |
|
2×Bio HiFi PCR Mix |
1ml |
5x1ml |
|
ddH2O |
1ml |
5x1ml |
使用說明：
PCR反應(yīng)體系參考如下:
|
組份 |
25ul體系 |
終濃度 |
|
Template DNA |
適量 |
< 500ng |
|
2×Bio HiFi PCR Mix |
12.5ul |
1x |
|
Forward Primer（10 μM） |
0.5-1ul |
0.2-0.4μM |
|
Reverse Primer（10 μM） |
0.5-1ul |
0.2-0.4μM |
|
ddH2O |
up to 25ul |
|
|
操作請?jiān)诒线M(jìn)行，組分解凍后請充分混勻。 |
||
PCR反應(yīng)程序參考如下：
|
步驟 |
溫度 |
時間 |
|
||||||||||||||||||||
|
預(yù)變性 |
98℃ |
30s-3min |
|
||||||||||||||||||||
|
變性 |
98℃ |
10 s |
30-35個循環(huán) |
||||||||||||||||||||
|
退火 |
根據(jù)引物Tm定 |
10 s |
30-35個循環(huán) |
||||||||||||||||||||
|
延伸 |
72℃ |
1-20s/kb |
30-35個循環(huán) |
||||||||||||||||||||
|
終延伸 |
72℃ |
5 min |
|
||||||||||||||||||||
|
備注： |
|||||||||||||||||||||||
|
1.預(yù)變性：質(zhì)粒DNA、λDNA、簡單基因組DNA等模板的預(yù)變性時間可設(shè)置為30s-1min，對于粗樣品、高GC、人基因組等復(fù)雜的模板，預(yù)變性時間可延長至3min。 |
|||||||||||||||||||||||
|
2.退火：2×Super Flash Master Mix中含有較高離子濃度，反應(yīng)退火溫度可設(shè)置高于理論引物Tm值2-3°C，如無法得到理想的擴(kuò)增效率時，可梯度改變退火溫度，進(jìn)行優(yōu)化；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，適當(dāng)提高退火溫度。
|
|||||||||||||||||||||||
|
3.循環(huán)數(shù)：可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)，如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足，循環(huán)次數(shù)太多，錯配機(jī)率會增加，所以在保證產(chǎn)物得率的前提下應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)。
4.延伸：根據(jù)其目的片段長度設(shè)置延伸時間，參考下表
|
|||||||||||||||||||||||
注意事項(xiàng)：
?產(chǎn)品盡量避免反復(fù)凍融。
?為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴 一次性手套操作。
暫無使用說明!
暫無產(chǎn)品問答!
暫無參考文獻(xiàn)
掃碼關(guān)注公眾號
中文
英文
