產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
?本產(chǎn)品采用獨(dú)特的疏水膜技術(shù)，可以高效專一地吸附DNA片段，同時(shí)徹底去除 瓊脂糖凝膠的鹽類，瓊脂等雜質(zhì)。本試劑盒適用于回收 100bp-20kb的 DNA 片段，回收效率高達(dá)85%，每個(gè)吸附柱地DNA結(jié)合能力可達(dá) 15-20 μg?；厥盏降?DNA 片段可以直接用于連接、PCR 反應(yīng)，酶切以及測(cè)序等。
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組份 |
BKM-JHS-50（50次） |
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Mini Column |
50 |
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2 ml Collection Tube |
50 |
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Buffer KG (Gel dissolving solution) |
50 ml |
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Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入無水乙醇 50 ml |
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Buffer KE (Elution solution) |
10ml |
使用說明：
1. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：在實(shí)驗(yàn)開始前，詳細(xì)閱讀該手冊(cè)熟悉各步驟，并準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分，50-65℃的 溫浴條件，1.5 ml離心管，5M NaAc pH5.2（可選）。
2. Buffer KW 第一次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入50ml無水乙醇。每次使用后，請(qǐng)立即擰緊蓋子。
3. Buffer KG 中包含了離液劑，操作該溶液時(shí)請(qǐng)戴上手套防護(hù)，避免溶液直接接觸皮膚。
4. 離心機(jī)的離心力至少為10000rpm，且所有離心步驟在室溫進(jìn)行。
（一）切膠
1. 瓊脂糖凝膠電泳分離 DNA 片段，任何類型或等級(jí)的瓊脂糖都可以適用。
注意：強(qiáng)烈建議使用新鮮的 TAE Buffer 作為電泳緩沖液。不要重復(fù)使用電泳緩沖液，否則會(huì)因其 pH 的升高而 減少產(chǎn)量。TBE 只能得到較低的產(chǎn)量。
2. 當(dāng)所需 DNA 片段完全分離時(shí)，轉(zhuǎn)移凝膠至紫外燈上，盡可能快地把所需地 DNA 片段切下來。
注意：紫外燈會(huì)損傷 DNA，所以切膠過程盡量迅速，減少紫外照射時(shí)間。且切膠時(shí)盡量把無目的 DNA 地多余凝膠切去。
3. 將帶有目的片段的凝膠塊轉(zhuǎn)移至已稱重地1.5 mL離心管中，稱重，得出凝膠塊地重量，加入3倍凝膠塊
體積地 Buffer KG。凝膠塊地體積可通過如下方法估計(jì)：當(dāng)凝膠薄片的重量為 0.1g，其體積為 100 μl，依次類推。50-65℃（一般瓊脂糖不能超過最高溫度65℃，低熔點(diǎn)瓊脂糖不超過55℃）水浴放置 5-10 min，期間顛倒混勻數(shù)次直至凝膠完全融化，并檢查混合物的顏色是否仍為淺黃色。
注意：1）若回收目的 DNA 片段小于 500 bp，請(qǐng)加入 1.5 倍凝膠塊體積的異丙醇，充分顛倒混勻。
2）在凝膠完全溶解之后，注意凝膠和 Buffer KG 混合物的顏色。一般情況下，混合物的顏色維持淺黃色。如果顏色變?yōu)槌壬蚣t色，需要加入5μl 5 M NaAc（pH 5.2）調(diào)低 pH 值，使混合物的顏色恢復(fù)為正常的淺黃色。不調(diào)節(jié)混合物的顏色，將降低 DNA 的回收率。
（二）吸附
4. 將 DNA/融膠液冷卻至室溫，然后全部轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，室溫13000 rpm 離心1 min。重復(fù)將收集管中的 濾液再一次通過吸附柱（可選，可提高回收效率），棄去收集管中的過濾液，將柱重新放入收集管。
注意：如混合液體積過大，可以分成數(shù)次上柱，每次上樣量不要超過 700 μl。
（三）漂洗
5. 向柱子中加入 700μl Buffer KW，室溫13000 rpm 離心1 min，棄去收集管中的過濾液，保留柱。
注意：Buffer KW 在首次使用之前必須加入 50 ml 無水乙醇，并置于室溫下保存。
6. 棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。（可選）重復(fù)用 70%乙醇洗滌柱子。室溫13000 rpm 離心1min。
7. 棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。室溫下，最高轉(zhuǎn)速或 13000rpm 離心2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。
注意：此步驟不可省，否則將導(dǎo)致乙醇?xì)埩粲?DNA 中，影響后續(xù)反應(yīng)。
（四）洗脫
8. 把柱子裝在一個(gè)新的 1.5 ml 離心管上，加入30-50μl的KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0或 純水代替，純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0），65 ℃放置2-5 min，13000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。（也可以將 KE 預(yù)熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時(shí)間至 1min）
注意：KE 體積具體取決于預(yù)期的終產(chǎn)物濃度，其可用滅菌的 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）或純水代替，純水需預(yù) 先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0。第一次洗脫可以洗出 80%以上的結(jié)合 DNA。如果再洗脫一次，可以把殘余的 DNA 洗脫出來（不推薦）。
注意事項(xiàng)：
?如不慎接觸皮膚可立即用大量的洗滌劑和清水清洗。
?為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴 一次性手套操作。
暫無使用說明!
暫無產(chǎn)品問答!
暫無參考文獻(xiàn)
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