產(chǎn)品簡介：
?本產(chǎn)品與BioZoL Plus（貨號：BKM-ZL-P100）配合使用(替代氯仿），常用于從細胞、組織、細菌、酵母等樣品中提取總RNA。
使用說明：
自備材料/準備工作
（1）請事先準備好75%乙醇、1.5ml EP管（CAT:BKM-EP-15F）若干。RNase 酶非常穩(wěn)定，是導(dǎo)致RNA降解最主要的物質(zhì)。它在一些極端的條件可以暫時滅活，但限制因素去除后有迅速復(fù)性。用常規(guī)的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑都不能使RNase完全失活，它廣泛存在于人的皮膚上，因此，在進行與RNA制備有關(guān)的分子生物學(xué)實驗時，必須戴手套。
（2） 根據(jù)移液器制造商的要求對移液器進行處理，一般情況下采用RNase-free水（CAT:BKM-FW)配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部，基本達到要求。取RNase-free的物品時必須戴手套。盡可能使用無菌，一次性塑料制品。
?組織樣本
1.液氮研磨:組織塊之間放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加入少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg組織加入1ml BioZoL plus，移至離心管進行下一步操作。
2.勻漿：組織樣品按50-100mg組織加入1ml BioZoL plus。另外，組織體積不能超過BioZoL plus體積的10%，否則勻漿效果會不好，用電動勻漿機充分勻漿需要1-2分鐘。
?細胞樣本
1.培養(yǎng)貼壁細胞：不需消化，可直接用BioZoL plus進行消化、裂解，BioZoL plus體積按10 cm2/ml比例加入。
2.懸浮細胞可直接收集、裂解，每1ml BioZoL plus可裂解5×106動物、植物或酵母細胞，或者107細菌細胞。
?操作步驟
1. 細胞或組織勻漿液加BioZoL plus后，室溫放置5min，使其充分裂解。注：此時可放入-70℃長期保持。
2. 按400μl RNAmate/ml BioZoL plus加入BioZoL plus，振蕩混勻后室溫放置5-15min。注：禁用漩渦振器，以免基因組DNA斷裂。
注：對于脂肪組織，按800μl RNAmate/ml BioZoL plus加入BioZoL plus。
3.4℃，12000g離心15 min
4.吸取上層水相，至另一離心管中。注：千萬不要吸取中間界面；若同時提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相于4℃冰箱。
5.按0.5ml異丙醇/ml BioZoL plus加入異丙醇混勻（異丙醇體積與水相體積相當(dāng)），室溫放置1-5min。
6.4℃ 12000g離心10min，棄上清，RNA沉于管底。
7.按1ml 75%乙醇/ml BioZoL plus加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。
8. 4℃ 8000g離心5min，盡量棄上清。
9.室溫晾干或真空干燥1-5min，注：RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。
10.可用50-100 μl RNase-free水（CAT:BKM-FW)或TE buffer（CAT:BKM-A00059)溶解RNA樣品。
11.（可選）測OD值定量RNA濃度。注：此方法提取RNA A260/A280值在1.6-1.8之間（TE中會高些）；產(chǎn)率估計：組織樣本:（μg RNA/mg組織）1-10 μg，培養(yǎng)細胞（μg RNA / 106 Cell）：5-15μg。
12.得到的RNA應(yīng)盡快做下游實驗。
注意事項：
?如不慎接觸皮膚可立即用大量的洗滌劑和清水清洗。
?RNAmate（氯仿替代物）和Trizol一起使用時請按5：1的用量（即：1ml Trizol加200ul的替代物）。
?為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴 一次性手套操作。
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暫無參考文獻
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