產(chǎn)品簡介：
?本產(chǎn)品采用獨(dú)特的疏水膜技術(shù)，可以高效專一地吸附 DNA 片段，同時徹底去除瓊脂糖凝膠的鹽類，瓊脂等雜質(zhì)。本試劑盒適用于回收 100bp~20 kb 的 DNA 片段，回收效率高達(dá) 85%，每個吸附柱地 DNA 結(jié)合能力可達(dá)15~20μg?；厥盏降?DNA 片段可以直接用于連接、PCR 反應(yīng)，酶切以及測序等。
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組份 |
BKM-CW-H50（50次） |
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Mini Column |
50 |
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2 ml Collection Tube |
50 |
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Buffer KG (Gel dissolving solution) |
50ml |
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Buffer KW (Wash solution ) |
使用前加入無水乙醇 50ml |
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Buffer KE (Elution solution) |
10ml |
使用說明：
1. 實(shí)驗前準(zhǔn)備工作：在實(shí)驗開始前，詳細(xì)閱讀該手冊熟悉各步驟，并準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分，50~65℃的溫浴條件，1.5ml 離心管，5M NaAc pH5.2（可選）。
2. Buffer KW 第一次使用前請按瓶上標(biāo)簽加入50ml無水乙醇。每次使用后，請立即擰緊蓋子。
3. Buffer KG 中包含了離液劑，操作該溶液時請戴上手套防護(hù)，避免溶液直接接觸皮膚。
4. 離心機(jī)的離心力至少為10000 rpm，且所有離心步驟在室溫進(jìn)行。
操作步驟：
(一)吸附
1. PCR 反應(yīng)結(jié)束后，從 PCR 反應(yīng)管中將反應(yīng)液移至干凈的1.5ml離心管中，其中每20-100ul 反應(yīng)液加入500ul的 Buffer KG，將混合液充分混合均勻，并檢查混合液顏色是否為淺黃色。
注意:1)一般情況下，混合物的顏色維持淺黃色。如果顏色變?yōu)槌壬蚣t色，需要加入 5ul 5 M NaAc (pH 5.2)調(diào)低 pH 值，使混合物的顏色恢復(fù)為正常的淺黃色。不調(diào)節(jié)混合液的顏色，將降低 DNA 的回收率。
2) 如純化的 PCR 反應(yīng)液體積超過100ul，加入4-5 倍體積的 KG。
2. 將混合液轉(zhuǎn)移到已裝好收集管的吸附柱內(nèi)，于 12000 rpm 離心 1min。保留柱，棄去收集管中的過濾液，把柱套回收集管中。重復(fù)將收集管中的濾液再一次通過吸附柱(可選，可提高回收效率)，棄收集管中的濾液，將柱子套回收集管中。
注意: 如混合液體積過大，可分?jǐn)?shù)次上柱，每次上樣量不要超過 700 ul。（二）吸附
3. 將DNA/融膠液冷卻至室溫，然后全部轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，室溫 13000 rpm 離心1min。重復(fù)將收集管中的濾液再一次通過吸附柱（可選，可提高回收效率），棄去收集管中的過濾液，將柱重新放入收集管。
注意：如混合液體積過大，可以分成數(shù)次上柱，每次上樣量不要超過 700 μl。
（二）漂洗
4. 向柱子中加入700μl Buffer KW，室溫13000 rpm 離心 30s，棄去收集管中的過濾液，將空柱子套回2ml收集管內(nèi)。
注意：Buffer KW 在首次使用之前必須加入 50 ml 無水乙醇，并置于室溫下保存。
5. 室溫下，最高轉(zhuǎn)速或13000 rpm 離心 2 min，以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。
注意：此步驟不可省，否則將導(dǎo)致乙醇?xì)埩粲?DNA 中，影響后續(xù)反應(yīng)。
（三）洗脫
6. 把柱子裝在一個新的1.5 ml離心管上，加入 30~50 μl 的 KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0或純水代替，純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0），65℃放置 2-5 min，13 000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。（也可以將 KE 預(yù)熱至 65℃，再加至膜上，可以減少放置時間至 1min）
注意：KE 體積具體取決于預(yù)期的終產(chǎn)物濃度，其可用滅菌的 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）或純水代替，純水需預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0。第一次洗脫可以洗出 80%以上的結(jié)合 DNA。如果再洗脫一次，可以把殘余的 DNA洗脫出來（不推薦）。
注意事項：
?如不慎接觸皮膚可立即用大量的洗滌劑和清水清洗。
?為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴 一次性手套操作。
暫無使用說明!
暫無產(chǎn)品問答!
暫無參考文獻(xiàn)
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