產(chǎn)品簡介：
?本產(chǎn)品是一款高效、便捷的高質(zhì)量第一鏈cDNA合成試劑盒,包含熱穩(wěn)定的M-MLV酶及其反應Buffer、RNA酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等第一鏈cDNA合成所需的所有組分，僅需加入 RNA 模板和水即可開始反應。獲得的cDNA 用于下游qPCR實驗。
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組份 |
BKM-RT-K100 |
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All-in-one RT Mix |
400ul |
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DNase |
2x50ul |
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10xDNase buffer |
200ul |
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Nuclease-Free Water |
2x1ml |
使用說明：
?針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品（推薦方案）
① 于冰上配制如下反應體系：
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試劑 |
用量 |
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RNA模板 |
50ng-1ug |
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All-in-one RT Mix |
4ul |
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DNase |
1ul |
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Nuclease-Free Water |
To 20ul |
注：推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量 RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；
④ 55℃溫育 15 min；
⑤ 反應結(jié)束后，85℃溫育 5 min 以終止反應；
⑥ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實驗；或立即保存于 -20℃。
?針對基因組DNA含量高的RNA樣品
(1) 基因組 DNA 污染去除
① 于冰上配制如下反應體系：
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試劑 |
用量 |
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RNA模板 |
50ng-1ug |
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DNase |
1ul |
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10xDNase buffer |
1ul |
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Nuclease-Free Water |
To 10ul |
注：推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；
注：若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴重，可適當延長 37℃溫育時間至 5 min。
④ 65℃溫育 2 min，使 dsDNase 失活，冰上放置。
(2) 第一鏈 cDNA 合成
① 于冰上配制如下反應體系：
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試劑 |
用量 |
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實驗（1）產(chǎn)物 |
10ul |
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All-in-one RT Mix |
4ul |
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Nuclease-Free Water |
To 20ul |
② 輕柔吸打混勻，瞬離；
③ 50℃溫育 15 min；
注：若目標RNA不含Poly(A)結(jié)構(gòu)，可預先25℃溫育10 min。
④ 反應結(jié)束后，85℃溫育5 min，以終止反應；
⑤ 將獲得的cDNA溶液置于冰上，用于后續(xù)實驗。
注：cDNA 溶液置于-20℃儲存，建議不超過1周；置于-80℃可長期儲存。
注意事項：
?盡量預混液中已經(jīng)包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物，不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA，也適用于不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物 RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。
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