產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本試劑可以從細(xì)胞、組織、細(xì)菌、酵母等樣品中提取總RNA。
保存條件： 2-8°C 避光保存
使用說(shuō)明：
A.樣品處理
?貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：10 cm2 的培養(yǎng)細(xì)胞中倒出培養(yǎng)液，并用PBS 洗滌一次，以除去盡可能多的過(guò)量溶液。
?懸浮細(xì)胞/酵母/細(xì)菌: 將懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞與培養(yǎng)液一起倒入離心管中，以8,000 rpm 離心2 分鐘，棄去上清液，然后加入50μl無(wú)菌水重懸細(xì)胞，直到?jīng)]有明顯的沉淀為止。
?組織: 將樣品轉(zhuǎn)移到用液氮預(yù)冷卻的研缽中，用杵研磨組織，并在此期間連續(xù)添加液氮，直到將其研磨成粉末為止。
B.加入BioZol
?貼壁培養(yǎng)細(xì)胞：加入1 ml 的TRIzol，使裂解物均勻地分布在細(xì)胞表面，然后使用移液器吹干細(xì)胞。 將細(xì)胞裂解液轉(zhuǎn)移至1.5ml EP 管中。
?懸浮細(xì)胞/酵母/細(xì)菌: 加入1ml BioZol。
?組織: 將磨碎的組織添加到含有1 ml BioZol 的1.5 ml EP 管中。
C.裂解樣品
加入BioZol 后，將其翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，直到細(xì)胞和組織粉末均勻分散而沒(méi)有結(jié)塊。 在室溫下放置5 分鐘，以完全分離核酸-蛋白質(zhì)復(fù)合物。
D. 加入氯仿
加入200μl氯仿，劇烈搖晃15 秒，然后在室溫下放置2 分鐘。
E.離心分層
以13,000 rpm 離心10 分鐘，然后將600μl無(wú)色上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5EP 管中。
F. 加入異丙醇
向上述600μl上清液中加入600μl異丙醇，用手腕將其上下顛倒幾次，然后在-20°C 下放置5 分鐘。
G.離心總RNA
以13,000 rpm 離心10 分鐘，小心丟棄上清液，并保存底部總RNA 沉淀。
H.沖洗總RNA
向沉淀的每個(gè)試管中加入1ml 70％乙醇，上下顛倒數(shù)次，然后以13,000 rpm 離心5 分鐘。 小心丟棄上清液并保存底部RNA 沉淀（可重復(fù)沖洗一次）。
I.揮發(fā)性殘留乙醇
倒掉洗液，再次短離心10s 后，用10μl Tip 頭吸干剩余的洗液，置于室溫使乙醇揮發(fā)干凈（～20min）。
J.溶解總RNA
每管加入20～100μl TE Buffer 或RNase Free H2O 溶解總RNA。
注意事項(xiàng)：
a. 盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，應(yīng)在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37°C 處理12h，然后在120°C 高壓滅30min 以除去殘留的DEPC。
b. 用于RNA 實(shí)驗(yàn)的試劑，須使用干熱滅菌（180°C，60min）或使用上述方法進(jìn)行DEPC 水處理滅菌后的玻璃容器盛裝（也可以使用RNA 實(shí)驗(yàn)用的一次性塑料容器)，使用的無(wú)菌水須用0.1%的DEPC 處理后再進(jìn)行高溫高壓滅菌。
c. RNA 實(shí)驗(yàn)用的試劑和無(wú)菌水都應(yīng)專(zhuān)用，避免混用后交叉污染。
暫無(wú)使用說(shuō)明!
暫無(wú)產(chǎn)品問(wèn)答!
暫無(wú)參考文獻(xiàn)
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