產(chǎn)品簡介:
?本產(chǎn)品是非放射性發(fā)光系統(tǒng),用于檢測固定在膜上的蛋白,靈敏度高,背景低,最低檢測靈敏度可達(dá)飛克級(jí),適用于檢測極微量的蛋白。發(fā)光信號(hào)較續(xù)時(shí)間較長,30min以后仍可維持75%的發(fā)光。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
飛克級(jí)靈敏度—最低可檢測飛克級(jí)以下的蛋白。
信號(hào)穩(wěn)定—發(fā)光時(shí)間較長,能進(jìn)行多次曝光,半小時(shí)以后仍可維持75%的發(fā)光。
信號(hào)強(qiáng)—發(fā)光信號(hào)比對(duì)碘苯酚增強(qiáng)的 HRP-魯米諾檢測體系得到極大增強(qiáng)。
使用說明:
?印跡膜制備:
執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記的抗體孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物,檢測系統(tǒng)必須基于HRP酶標(biāo)記的抗體。充分的洗滌對(duì)于降 低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。
?ECL工作液的配置:
在使用前取等量A液和B液混合均勻。在吸取A液和B液時(shí)需采用不同的新槍頭。
?蛋白或核酸信號(hào)顯現(xiàn):
1)將混合液滴加至膜上,每平方厘米膜片至少使用100-200ul以覆蓋全膜,小心趕盡氣泡(注意不要在膜片表面形成氣泡)。
2)用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光;
3)根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間,也可選擇不同時(shí)間多次曝光,以達(dá)最佳效果。
注意事項(xiàng):
?勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強(qiáng)光下,否則會(huì)導(dǎo)致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時(shí)間暴露在陽光下。
?使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時(shí)一定要用不同的槍頭,互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑。
?蛋白點(diǎn)熒光較弱時(shí)可以適當(dāng)延長曝光時(shí)間;使用過少的ECL工作液不利反應(yīng)進(jìn)行,為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。
?使用生物素/親和素體系時(shí),避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因?yàn)槊撝谭壑泻卸喾N內(nèi)源性生物素,容易產(chǎn)生非特異性信號(hào)。
?避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
?金屬氧化物顆??赡軙?huì)造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點(diǎn),避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,建議使用塑料的平頭鑷子。
?疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,應(yīng)避免使用NaN3,如必須使用,濃度不要超過0.01%。
?為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴 一次性手套操作。