產(chǎn)品簡介:
?本產(chǎn)品含0.25%胰蛋白酶,不含 EDTA和酚紅,經(jīng)0.1μm過濾除菌,可直接用于細(xì)胞消化。
使用說明:
?貼壁細(xì)胞的消化參考:
1.吸去培養(yǎng)液,用無菌的 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
2.加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 1-5 分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長消化時(shí)間。
3.顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來。此時(shí)吸除消化液。加入含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4.如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
5.如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鐘,沉淀細(xì)胞,盡量去除胰蛋白酶消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
?消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長狀況。
?對(duì)于胰酶中EDTA、酚紅的選擇,可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,對(duì)于一般的腫瘤細(xì)胞,選擇含EDTA的胰酶消化液。對(duì)于較敏感、脆弱的細(xì)胞,例如原代細(xì)胞及很容易消化的細(xì)胞,選擇不含EDTA的胰酶消化液,如果細(xì)胞特別敏感,需要選擇胰蛋白酶濃度更低的消化液。如果是需要用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,則選用不含EDTA的胰酶消化液。
?為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴 一次性手套操作。