使用說(shuō)明：
細(xì)胞數(shù)量確定
?將細(xì)胞懸浮液（100μL/孔）接種在96洞孔板中。將板在潮濕的培養(yǎng)箱中預(yù)孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。
?向板的每個(gè)孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因?yàn)樗鼈儠?huì)干擾O.D.讀數(shù)。
?將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時(shí)，然后使用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm處的吸光度。
細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性測(cè)定
?將種子細(xì)胞以103-104個(gè)細(xì)胞/孔的密度在96孔板中在100μL培養(yǎng)基中培養(yǎng)，含有或不含有待測(cè)化合物。將細(xì)胞在CO2培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)24小時(shí)。
?將10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)加入板中。
?將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如，6,12,24或48小時(shí)）。
?使用重復(fù)移液器向板的每個(gè)孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因?yàn)樗鼈儠?huì)干擾O.D.讀數(shù)。
?將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時(shí)。
?在讀取印版之前，重要的是在軌道振動(dòng)器上輕輕混合1分鐘，以確保顏色均勻分布。
?使用酶標(biāo)儀測(cè)量450 nm處的吸光度。
數(shù)據(jù)分析
統(tǒng)計(jì)分析有幾種方法，您可以選擇使用O.D.值或細(xì)胞數(shù)量，我們提供其中一種方法。
細(xì)胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100
抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100
As =實(shí)驗(yàn)孔吸光度（含有細(xì)胞，培養(yǎng)基，CCK-8和待測(cè)化合物的孔的吸光度）。
Ab =空白孔吸光度（含有培養(yǎng)基和CCK-8的孔的吸光度）。
Ac =對(duì)照孔吸光度（含有細(xì)胞，培養(yǎng)基和CCK-8的孔的吸光度）。
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
? 細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)。
? 使用培養(yǎng)基，等比稀釋細(xì)胞懸液為一個(gè)濃度梯度，通常需要5-7個(gè)濃度梯度，每組幾個(gè)復(fù)孔。然后接種細(xì)胞。（注意每孔的細(xì)胞數(shù)量。如果您將細(xì)胞懸液稀釋在管中，在加入培養(yǎng)板的孔之前，請(qǐng)小心再次混勻細(xì)胞。每孔中細(xì)胞懸液的體積應(yīng)該是一致的。）
? 培養(yǎng)直至細(xì)胞貼壁（通常2-4小時(shí)），然后每100 μl培養(yǎng)基加入10 μl CCK-8。繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，用酶標(biāo)儀測(cè)量450nm處的吸光度。制作出一條以細(xì)胞數(shù)為X軸坐標(biāo)，O.D.值為Y軸坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
可以基于該曲線確定待測(cè)樣品的細(xì)胞數(shù)。使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的先決條件是培養(yǎng)檢測(cè)條件相同。
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