血清是否需要熱滅活?
血清的最佳工作溫度一般是在37℃左右,所以熱滅火對于血清而言,也是一種不小的傷害,會導(dǎo)致一些營養(yǎng)成分流失,進而影響細胞狀態(tài)。
但如果所用血清中含有補體,且所培養(yǎng)的細胞、所涉及的實驗對補體相關(guān)的蛋白較為敏感,建議進行熱滅活處理。
如何合理熱滅活
必須要滅活,根據(jù)血清廠家多年來總結(jié)的經(jīng)驗,常規(guī)解凍后,40℃水浴加熱20分鐘即可,能夠最大程度地保留營養(yǎng)成分。
另外,還有三個細節(jié)需要注意:
1.將血清用四步法徹底解凍后再進行熱滅活。
步驟 |
溫度 |
100m |
500ml |
第一步 |
4度 |
完全解凍 |
完全解凍 |
第二步 |
室溫 |
10min |
20min |
第三步 |
20℃水浴 |
15min |
25min |
第四步 |
37℃水浴 |
20min |
35min |
2.為盡可能減輕熱滅活對血清品質(zhì)的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。
3.溫度需有對照
最好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(初始溫度與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入40℃水浴,在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時地輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清,當(dāng)溫度計顯示達到40℃左右,開始計時。